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TURBO™ DNase 非特异性地切割双链 DNA,使 5' 磷酸化寡脱氧核苷酸离开双链。它增强了 DNA 结合的亲和力,在盐存在的情况下保持活性。 注:该产品仅为酶。如果您想用这种酶加试剂产品使酶失活,并在酶切后去除样品中的二价阳离子,请参阅TURBO 无 DNA ™试剂盒。 TURBO™ DNase 的特点包括: •活性和催化效率分别高达 50x 和 350% •在含盐量为 0.25 M 的溶液中高效降解 DNA •将 DNA 高效酶切为寡脱氧核苷酸 •在清除体外转录反应中的 DNA 模板方面具有较大优势 •最初无 RNase 和重组体 使用 TURBO™ DNase DNase I 被广泛用于在 RT-PCR 处理之前的 RNA 样品中清理 DNA 污染。常规 DNase I 对 DNA 亲和力较弱,对低浓度 DNA 进行切割时效率很低。此外,DNase I 对盐很敏感;低至 20 mM 的 NaCl 可使酶活性降低 30%。最后,DNase I 是从牛胰腺中纯化而来,牛胰腺是 RNase A 最丰富的天然来源之一。在 DNase I 制备过程中,存在 RNase 活性受污染的风险,因此要求必须将酶彻底纯化。尽管存在这些限制,如今研究人员所使用的 DNase I 与半个多世纪前 Kunitz 首次表征的酶相同。 一种特性优于野生型 DNase I 的 DNase TURBO™ DNase 是使用蛋白质工程方法研制而成的,该方法将氨基酸变化引入野生型 DNase I 的 DNA 结合口袋中。这些变化显著增强了蛋白质对 DNA 的亲和力。结果得到一种通用酶,该酶对 DNA 有 1/6的 Km,且有在接近 200 mM 一价盐的溶液中保持至少 50% 峰值活性的功能,甚至在 DNA 浓度为纳摩尔级水平 (nM) 时仍然有活性。在采用 DNase I 或 TURBO™ DNase 处理进行体外转录反应时,TURBO™ DNase 去除的质粒 DNA 模板起始量比野生型酶去除的多 63x。TURBO™ Dnase 结合超低浓度 DNA 的高效程度意味着该酶在去除痕量 DNA 污染时特别有效。因为随着 DNase 反应的进行,可清理的 DNA 底物的量会减少,所以对于从样品中彻底去除 DNA 而言,这就变得更加重要。TURBO™ DNase 与 DNA 亲和力强,所以在与野生型 DNase 的对比中,其有功能上的优势。这在 RT-PCR 中有较好的应用价值,在 RT-PCR 过程中,即使少量 DNA 拷贝也会导致 PCR 产生假阳性结果。
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