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Thermo Scientific FastAP 热敏感性碱性磷酸酶可催化 DNA、RNA 和核苷酸释放 5'- 和 3'-磷酸基团。该酶还可去除蛋白中的磷酸基。 FastAP 是一种新型碱性磷酸酶，在所有 Thermo Scientific 限制性内切酶缓冲液和 PCR 缓冲液中均有活性。其可在 37°C 下于 10 分钟内对所有类型的 DNA 末端（平末端、5'-和 3'-突出端）进行去磷酸化。该酶在 75°C 下于 5 分钟内失活（参见支持性数据中的图 1）。因此，在连接前不需要去除碱性磷酸酶。 产品优势 • 重组酶 • 快速去磷酸化—37°C 下 10 分钟 • 快速、完全失活—75°C 下 5 分钟 • 载体 DNA 的同时酶切和去磷酸化 • 在限制性内切酶和 PCR 缓冲液中有 100% 活性 • PCR 纯化结合 Exo I • 蛋白去磷酸化 一个方案适用于所有类型的 DNA 末端： •5'-突出端 • 3'-突出端 • 平末端 • 单核苷酸 应用 • 克隆载体 DNA 的去磷酸化，以防止连接期间的重新环化 • 载体 DNA 的同时酶切和去磷酸化 • PCR 产物纯化：PCR 产物测序前的核苷酸降解 • T4 多聚核苷酸激酶标记前核酸 '-末端的去磷酸化5 • 必须进行 DNA 和 RNA 底物去磷酸化的其他应用 • 蛋白去磷酸化 注意 • FastAP 热敏感性碱性磷酸酶与 DNA 的结合可能导致琼脂糖凝胶中发生条带位移。为避免发生这种情况，可使用 6X DNA 上样染料 & SDS 溶液在 65°C 下孵育样品 10 分钟，在冰上冷却后进行电泳。 •FastAP 热敏感性碱性磷酸酶在所有限制性酶缓冲液中都有活性，可直接加入到酶切的 DNA 中。去磷酸化处理前无需热失活限制性酶。
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