Ambion TaqMan MicroRNA Cells-to-CT?试剂盒无需 RNA 纯化，可直接从培养细胞进行 microRNA (miRNA) 分析。该试剂盒率先为少量样品来源的 miRNA 表达分析提供了一种简单、完整的工作流程，还可轻松整合到自动化高通量应用中。?经验证的完整解决方案 — 优化的工作流程包含细胞裂解试剂、DNase、TaqMan MicroRNA RT 试剂和 TaqMan 通用 PCR 预混液? 快速、简单、便捷 — 样品制备仅需10分钟；无需繁琐的 RNA 分离? 黄金标准特异性 — 通过 TaqMan MicroRNA 试剂获得优异的结果? 稳健的性能 — 结果与纯化 RNA 相当? 上样量动态范围宽 — 从10至100,000个细胞的线性检测经验证的完整解决方案TaqMan MicroRNA Cells-to-CT 试剂盒采用独特的培养细胞裂解方法，可在去除基因组 DNA 的同时保留 RNA 的完整性，其包含可用于实时荧光定量 PCR 分析的 TaqMan MicroRNA 逆转录 (RT) 试剂和 TaqMan 通用 PCR 预混液。TaqMan MicroRNA Cells-to-CT 试剂盒已通过 TaqMan MicroRNA 测定试剂进行了广泛测试和验证，并可单独销售。简单、便捷的10分钟样品制备TaqMan MicroRNA Cells-to-CT 试剂盒采用简单的10分钟样品制备流程（图1），可用于板装或管装的 10–100,000 个培养细胞?样品。在 PBS 中清洗细胞，再置于室温下裂解8分钟；同时，进行 DNase 处理。加入终止液并孵育2分钟以在室温下终止裂解。TaqMan MicroRNA Cells-to-CT 试剂盒裂解物可直接用于逆转录或在 -20°C 储存长达5个月。由于样品无需 RNA 纯化过程，所有种类的小 RNA 都可分析。由于样品可以在培养板（96或384孔）中直接处理，样品处理步骤得已减少，样品丢失或转移错误的风险也极大降低。无需加热、清洗或离心；该试剂盒将传统耗时、费力的过程大幅简化并缩短至10分钟内。黄金标准特异性 — 通过 TaqMan MicroRNA 试剂获得优异的结果Applied Biosystems 已针对与短链成熟 miRNA 相关的基本性问题开发出先进的解决方案。TaqMan MicroRNA 测定试剂（单独销售）含有一中独特的靶标特异性茎环逆转录引物（图2）。茎环结构可与目标成熟体miRNA特异性结合，完全不同于其他不加以区分而结合样品中所有 RNA 的方法。TaqMan MicroRNA Cells-to-CT 试剂盒随附的 TaqMan MicroRNA RT 试剂专用于配合这种创新实验方案设计使用。准确的 miRNA 表达分析需要区分高度同源的成熟 miRNA 靶标。TaqMan MicroRNA Cells-to-CT 试剂盒与 TaqMan MicroRNA 测定试剂联用可为高度同源靶标区分提供所需的特异性，如图3所示。在该示例中，将利用 TaqMan MicroRNA Cells-to- CT 试剂盒获得的裂解液或纯化 miRNA 用于基于 TaqMan MicroRNA 检测试剂盒的实时荧光定量 PCR 反应，以检测外源性添加 miRNA 模板中的单碱基差异。采用 TaqMan MicroRNA Cells-to-CT 试剂盒裂解物获得的特异性（图 3A）与使用纯化 RNA 相同（图 3B）。稳健的性能 — 结果与纯化 RNA 相当此全新试剂盒已通过多种 TaqMan MicroRNA 测定试剂进行了多次测试，经证实，性能与纯化 RNA 相同（图4）。TaqMan MicroRNA Cells-to-CT 试剂盒工作流程支持使用现有 > 900 种 TaqMan MicroRNA 测定试剂极佳地评估 miRNA 表达。上样量动态范围宽 — 从10到100,000个细胞的线性检测由于 miRNA 表达水平因样品类型、发育阶段或疾病进展而差异悬殊，因此，配备灵敏的 miRNA 表达分析工具非常重要。现在，可以在一次实验中准确定量从几个拷贝到数百万个拷贝的 miRNA 靶标。TaqMan MicroRNA Cells-to-CT 试剂盒可靠地检测10个细胞到100,000个细胞。此外，为尽可能提高灵敏度，TaqMan MicroRNA Cells-to-CT 试剂盒允许至多 33% 的逆转录反应体积由样品裂解物组成（单通路逆转录）。图5展示了 TaqMan MicroRNA Cells-to-CT 试剂盒裂解物在5个数量级的细胞上样量下（每次裂解反应）的线性和灵敏度；结果与纯化 RNA 相当。此外，TaqMan MicroRNA 测定试剂的宽动态范围不受 TaqMan MicroRNA Cells-to-CT 试剂盒裂解物的影响（未显示相关数据）。久经验证的性能、成熟的组合TaqMan MicroRNA Cells-to-CT 试剂盒的所有成分均经过充分优化，可实现稳定可靠的性能。这有助于避免因组合单独的样品制备、逆转录、预扩增和实时荧光定量 PCR 试剂盒而引入的不确定因素。为了提高质量保障，已采用 TaqMan MicroRNA 测定试剂验证了 TaqMan MicroRNA Cells-to-CT 试剂盒。
