TaqMan Fast Cells-to-CT 试剂盒可使用快速循环、实时荧光定量 PCR 化学和仪器直接利用培养细胞进行基因表达分析而无需 RNA 纯化。TaqMan Fast Cells-to-CT 试剂盒：? 完整 — 优化的工作流程包括去除 gDNA 的细胞裂解试剂、RT 酶混合物、RT 缓冲液和 TaqMan Fast 通用 PCR 预混液? 快速 — 在室温下于7分钟内制备样品，包括 DNase 处理；TaqMan Fast 通用 PCR 预混液在约35分钟内提供实时荧光定量 PCR 结果? 便利 — 裂解样品置于管中或直接置于96或384孔培养板中? 稳健 — 可对每个样品的10至100,000个细胞进行基因表达分析，结果与使用纯化 RNA 相当? 高效 — 含有足以生成500个实时荧光定量 PCR 结果的试剂（起始样品量为100份）经验证的完整解决方案TaqMan Cells-to-CT 技术采用一种独特的培养细胞裂解方法，可在去除基因组 DNA 的同时保留 RNA 的完整性，此外，该试剂盒含有用于 Fast 实时荧光定量 PCR 分析的逆转录 (RT) 试剂和 TaqMan Fast 通用型 PCR 预混液，并已通过金标准 TaqMan 基因表达检测试剂盒（单独出售）进行了广泛检测和验证。对所有试剂盒组分进行了优化，以实现一致和可靠的性能，消除了组装用于样品制备、逆转录和 Fast 实时荧光定量 PCR 的单独试剂盒所涉及凭猜测所作之工作。快速、方便的工作流程TaqMan Fast Cells-to-CT 试剂盒包含一个简单的 7 分钟样品制备程序（见图），可直接在 96 或 384 孔培养板或试管中与 10 至 100,000 个培养细胞配合用。在 PBS 悬液中洗涤细胞，置于室温下裂解 5 分钟；同时进行可选 DNase 处理。裂解过程在加入终止液，室温孵育2分钟后被终止。该试剂盒大大简化了传统的耗时、劳动密集型工艺，并将其缩短至 7 分钟。裂解物现已准备好使用试剂盒中包含的优化 RT 系统进行逆转录，或可在 -20°C 下储存长达 5 个月，以供将来分析。所提供的 TaqMan Fast 通用型 PCR 预混液可提供灵敏和可重现结果，速度是标准 PCR 试剂和仪器的大约 3 倍。快速、简单样品制备以及快速循环实时荧光定量 PCR 结果（约35分钟）的组合可比先前的方法更快速定量基因靶标。与传统的 RNA 纯化和标准实时荧光定量 PCR 相比，TaqMan Fast Cells-to-CT 试剂盒工作流程将从样品到结果的时间缩短 40% 或更多。稳健、灵敏且可靠的结果可对不同表达水平基因的广泛样品起始量进行准确的基因表达分析，这在传统上对研究人员而言是一种挑战。因此，耐用溶液对于对少数或多个细胞的 RNA 谱分析非常重要。所示证明了使用来自 TaqMan Fast Cells-to-CT 试剂盒的裂解物在 5 log 细胞起始量（每次裂解反应 10–105 个细胞）中观察到的出色信号呈线性 (R2 = 0.997)（见图）。因此，单一试剂盒可用于有限或致密样品的基因表达分析，不会因 PCR 抑制剂导致数据完整性受损。使用 TaqMan Fast Cells-to-CT 试剂盒的细胞裂解物的 PCR 性能与使用提供的 TaqMan Fast 通用型 PCR 预混液纯化 RNA 的性能相当（见图）。TaqMan Cells-to-CT 试剂盒裂解物和纯化 RNA 对5个数量级的细胞上样等效物进行线性检测。在使用相同逆转录和 PCR 试剂时，TaqMan Fast Cells-to-CT 试剂盒裂解物在10细胞上样量时的灵敏度高于纯化 RNA，因为在制备期间更高效地保留靶标分子，即没有与样品转移或加热过程相关的 RNA 损失。相对于采用竞争对手 Q 的 RT 和 Fast 预混液逆转录并 PCR 扩增的纯化 RNA，TaqMan Fast Cells-to-CT 试剂盒也具有更出色的性能。在使用竞争对手 Q 的试剂和快速循环时观测到的动态范围为102至105个细胞等效物，或比 TaqMan Cells-to-CT 试剂盒裂解物或采用 TaqMan Fast 通用 PCR 预混液扩增的纯化 RNA 低1个数量级（如图所示）。TaqMan Fast 通用 PCR 预混液制剂可比标准试剂和仪器更快地提供灵敏、可重现结果，在较广的靶基因和浓度范围内保持稳健性能。
