应用生物系统 TaqMan Advanced miRNA cDNA 合成试剂盒使用通用型逆转录 (RT) 化学试剂盒制备 cDNA 模板，与 TaqMan Advanced miRNA 测定一起用于检测和定量生物样本中的成熟 miRNA。TaqMan Advanced miRNA 工作流程的特点包括：?灵敏度：高灵敏度便于量化低表达 miRNA 靶标，尤其在血浆、血清和组织等生物流体中?灵活性：通用 RT 化学试剂可为样品中存在的所有 miRNA 生成通用的 cDNA 模板，从而使研究设计具有灵活性?节省样品：仅需 2 μL 血浆/血清上样量，即可生成足够用于600次 qPCR 反应 (20 μL) 或1200次 qPCR 反应 (10 μL) 的 cDNA? 特异性：5’ 连接步骤允许沿着整个 miRNA 序列区分单碱基对，包括 5’ 端难以检测的错配?黄金标准 TaqMan 化学试剂：该试剂盒专门与用于 qPCR 的 TaqMan ?Advanced miRNA 测定试剂配合使用，该方法利用了赛默飞世尔科技的行业领先生物信息学测定设计流程和验证系统，有助于确保高特异性和极低交叉反应性，即使对于密切相关的 miRNA 系列也是如此。TaqMan Advanced miRNA cDNA 合成试剂盒在各端使用适配器序列的 3’ 多聚腺苷酸拖尾和 5’ 连接在逆转录前延伸样品中的成熟 miRNA。通用 RT 引物识别成熟 miRNA 的 5’ 和 3’ 延伸末端上存在的通用序列。样本中所有成熟 miRNA 都被逆转录为 cDNA。为了改善低表达 miRNA 靶标的检测，然后使用通用 miR-Amp 引物和 miR-Amp 预混液扩增 cDNA，以均匀增加各个靶标 cDNA 的量，并保持相对差异表达水平。与传统预扩增不同，通用 miR-Amp 引物可识别添加至所有成熟 miRNA 的 5’ 和 3’ 端上的通用序列，确保不存在扩增偏倚。
