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一、产品介绍 RIPA 裂解液是一种常规的细胞组织快速裂解液。RIPA 裂解液裂解获得的蛋白样品可用于常规PAGE,WB,IP和 ELISA 等实验。 本产品也可以用于动物，植物细胞或组织样品，也可用于真菌或细菌样品。4 度运输，-20℃保存，有效期 1 年。 二、使用说明： 1.对于培养细胞样品： a.融解 RIPA 裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入 PMSF，使PMSF 的最终浓度为1mM，或者根据实验需要加入适当的上述蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物。 b.对于贴壁细胞：去除培养液，用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰，可以不洗)。按照 6 孔板每孔加入 150-250 微升裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触动物细胞 1-2 秒后，细胞就会被裂解。植物细胞宜在冰上裂解2-10min。对于悬浮细胞：离心收集细胞，轻轻 vortex 或者弹击管底以把细胞尽量分散开。按照6 孔板每孔细胞加入150-250 微升裂解 液的比例加入裂解液。轻弹管底以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成 50-100 万细胞/管，然后再裂解。 对于细菌或酵母：对于 1ml 菌液或酵母液，离心去上清，如果有必要可以使用PBS 洗涤一次，充分去除液体后，轻轻 vortex 或者弹击管底以把细菌或酵母尽量弹散。加入 100-200 微升裂解液，轻轻vortex 或者弹击管底以混匀，冰上裂解 2-10min。 如果希望获得更好的裂解效果，细菌和酵母可以分别使用溶菌酶和破壁酶(Lyticase)消化，然后再使用本裂解液进行裂解。 裂解液用量说明：通常 6 孔板每孔细胞或者 1ml 的菌液或酵母液中的细菌和酵母量加入150 微升裂解液已经足够，细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到 200 微升或 250 微升。每100 万动物细胞用100微升本产品裂解后获得的上清，其蛋白浓度约为 2-4mg/ml，不同细胞有所不同。c. 充分裂解后，10000-14000g 离心 3-5 分钟，取上清，即可进行后续的 PAGE、Western 和免疫沉淀等操作。2. 对于组织样品： a. 把组织剪切成细小的碎片。 b. 融解 RIPA 裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入 PMSF，使PMSF 的最终浓度为1mM，或者根据实 验需要加入适当的上述蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物。 c. 按照每 20 毫克组织加入 150-250 微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量,延长裂解时间。) d. 用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。也可以把组织样品冷冻后液氮研磨，研磨充分后加入裂解液进行裂解。 e. 充分裂解后，10000-14000g 离心 3-5 分钟，取上清，即可进行后续的 PAGE、Western 和免疫沉淀等操作。每 20mg 冻存的小 鼠肝脏组织用 200 微升本裂解液裂解后获得的上清，其蛋白浓度约为15-25mg/ml，不同状态的不同组织有所不同。 f. 如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通货号 规格 BTYA0304 100mL 过强烈 vortex 使样品裂解充分。然后同样离心取 上清，用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆器或研磨设备，缺点是不如匀浆或研磨那样裂解得比 较充分。注：RIPA 裂解液的裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物，属正常现象。该透明胶状物为含有基因组DNA 等的复合物。在不检测和基因组 DNA 结合特别紧密的蛋白的情况下，可以直接离心取上清用于后续实验；如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白，则可以通过超声处理打碎打散该透明胶状物，随后离心取上清用于后续实验。如果检测一些常见的转录因子，例如 NF-kappaB、p53 等时，通常不必进行超声处理，就可以检测到这些转录因子。 三、注意事项： 1、为取得最佳的使用效果，尽量避免过多的反复冻融。可适当分装后使用。2、裂解样品的所有步骤应在冰上或 4℃进行。 3、本产品仅限专业人员的科学研究使用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。 4、为了您的健康和安全，请穿实验服和一次性手套操作
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