丽春红染色

丽春红，（又名丽春红S，猩红S，Ponceau S），是一种常用的蛋白质染色剂。在蛋白质电泳中，丽春红可以与蛋白质结合并形成复合物，使蛋白质在凝胶中呈现出明显的色带，便于观察和分析蛋白质的迁移情况。在WB中，同样有重要的应用。

1. 确认蛋白是否转膜成功：丽春红染色可以帮助确认蛋白是否成功转移到膜上，以及转移的效率如何。这点非常重要，为后续可能出现的trouble shooting提供依据。 

2. 确认蛋白的表达水平：通过观察染色后的转印膜，可以初步评估目标蛋白在样品中的表达水平。

丽春红染色液既可以对NC膜进行染色，也可以对PVDF膜进行染色。注意通常不对尼龙膜进行染色，因为染色液和尼龙膜强烈结合并产生高背景。对蛋白的检测下限是250ng。

丽春红染色液的成分与配方：

丽春红染色液的标准配方是 0.1% 的丽春红染料和5% 的冰醋酸。

例如配制500mL的丽春红染色液：0.5g丽春红粉末，25mL的冰醋酸，加ddH2O定容至500mL，通常无需调节pH。

不同公司售卖的丽春红染色液中丽春红染料和冰醋酸的比例稍有不同。也有一些人用三氯乙酸和磺基水杨酸替代冰醋酸都是可以的。

丽春红染色步骤：

1.将 PVDF 膜浸没在丽春红染色液中，摇动 3-10 分钟或更长时间。

2. 使用蒸馏水、PBS 缓冲液或其它适当溶液对印迹膜进行漂洗 2-3 次，每次 5s，去除未与蛋白结合 的染料，直至膜上出现清晰条带，记录结果。

3. 检测结束后，再次使用蒸馏水，PBS 缓冲液或其它适当溶液对印迹膜进行漂洗 2-3 次，每次 3-5 分钟，去除与蛋白结合的丽春红染料。

4. 按照正常步骤，进行后续的 Western Blot