固定

为了防止获取的组织自溶，避免目标蛋白的性状发生改变，对于取到的组织样本需要尽快进行固定。固定前要考虑固定液，固定方法和固定时长。

固定液的类型很多，以上是对固定液选择的一些建议。10% 中性缓冲福尔马林是应用最广的常用固定液之一，它对大多数的病理标本都具有较好的固定作用。固定液的体积是组织体积的10-20倍。

    固定的方法有浸泡固定、灌注固定和冷冻固定。浸泡固定就是将组织块直接放入固定液中。在动物模型）中，经心肌灌注固定剂是首选的固定方法。

固定时间取决于组织块的大小和类型。多数情况下，可尝试使用4%多聚甲醛固定18-24小时。固定不充分可能会导致组织形态变化，而固定过度则会导致抗原的掩盖，即使后面的抗原修复也无法获得信号。

包埋

  包埋的目的是为了给予组织一定的支撑，避免组织在切片的时候变形。在包埋之前，组织需要进行脱水和透明处理。

   因为包埋剂和水不相容，组织中的水分会组织包埋剂的进入，所以包埋前需要对组织进行脱水处理。将组织块一次放入以下浓度的乙醇中（脱水时间与组织的大小和类型有关） 70%乙醇 80%乙醇 95%乙醇 95%乙醇100%乙醇 100%乙醇。

脱水后的组织，需要用透明剂（通常是二甲苯）把乙醇置换出来，通常浸泡30-60分钟。

经过以上步骤，可以开始对组织进行包埋处理。

包埋剂通常是低熔点（45℃）的石蜡或者是OCT，分别对应石蜡切片和冰冻切片。石蜡包埋的温度建议不要超过60℃，先倒石蜡，后放组织。室温自然冷却（也可以过夜），再放入冰箱冷藏10min，取出蜡块。

包埋的方向对于后续的实验也非常重要